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DNA合成儀的在生物學(xué)中的應(yīng)用

更新時(shí)間:2016-07-25      點(diǎn)擊次數(shù):1534
  
  DNA合成儀 -在生物學(xué)中的應(yīng)用
  
  DNA合成儀在分子生物學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用非常廣泛,大體可以概括為以下幾個(gè)方面。
  
  1.合成PCR引物,DNA測(cè)序引物和雜交探針
  
  2.合成生物素標(biāo)記的DNA包括生物素標(biāo)記的引物
  
  用于DNA固相測(cè)序法(solid-phasesequencing),采用生物素標(biāo)記的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,再用抗生物素蛋白釣出擴(kuò)增產(chǎn)物,由于抗生物素蛋白與磁珠共價(jià)結(jié)合,所以用磁鐵吸附即可釣出擴(kuò)增產(chǎn)物,大大簡(jiǎn)化了DNA測(cè)序模板的純化步驟。此外,生物素標(biāo)記的探針用于非放射性雜交檢測(cè)。DNA合成儀可用于合成生物素標(biāo)記的探針和引物。
  
  3.合成熒光素標(biāo)記的DNA包括熒光素標(biāo)記的引物
  
  可在合成的DNA片段5’端標(biāo)記幾種不同顏色熒光素(6-FAM、TET、HEX),用于全自動(dòng)DNA測(cè)序儀,還可用于PCR片段大小分析及定量分析,即基因組型分析和基因表達(dá)水平的研究。此外熒光素標(biāo)記的探針用于原位PCR雜交檢測(cè),進(jìn)行基因在染色體上的定位。而熒光素標(biāo)記的DNA包括熒光素標(biāo)記的引物皆可采用DNA合成儀進(jìn)行合成。
  
  4.合成反義核酸
  
  反義核酸可用于反義調(diào)控和基因治療。反義調(diào)控指在體外合成與靶序列互補(bǔ)的DNA片段,轉(zhuǎn)化細(xì)胞后與靶序列結(jié)合,即在轉(zhuǎn)錄水平上抑制基因表達(dá),但由于細(xì)胞內(nèi)存在限制酶系統(tǒng)會(huì)把外源核酸降解,所以反義核酸要經(jīng)硫化修飾后再轉(zhuǎn)化細(xì)胞。另外癌癥、艾滋病等也可采用反義核酸進(jìn)行基因水平的治療。DNA合成儀是合成反義核酸的儀器。
  
  5.合成磷酸標(biāo)記的DNA
  
  用DNA連接酶把合成的磷酸標(biāo)記的DNA片段連接起來(lái),在體外進(jìn)行基因構(gòu)建。磷酸標(biāo)記的DNA常用DNA合成儀來(lái)合成。
  
  6.合成RNA
  
  用DNA合成儀合成的RNA主要用于核酶研究,核酶可作為生物導(dǎo)彈轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中,定點(diǎn)切割有病基因,如癌基因等。
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